08. Versuch: Ultrazentrifugation - Oligomerisierungszustand von Proteinen

Proteine "arbeiten" oder "funktionieren" häufig zusammen mit Partnerproteinen, mit denen sie sich assozieren. Die Interpretation vieler Experimente steht und fällt mit der Kenntnis um die Zahl dieser Assoziationspartner. Mit Hilfe der analytischen Ultrazentrifugation können molekulare Massen und Assoziationsformen von Proteinen bestimmt werden. Dabei können beim laufenden Rotor (bei Drehzahlen bis ca. 60.000 U/min !) Spektren der Substanzen und ihrer radialen Verteilung aufgenommen werden. Der Versuch führt anhand eines Zentrifugenlaufs zum Erzielen eines Sedimentationsgleichgewichts an dem Enzym Aldolase in diese Technik ein.

Betreuer

Versuchsanleitung (PDF)

Fragen zur Versuchsvorbereitung

• Was bezeichnet man als Sedimentation?
• Welche Kräfte wirken auf das Teilchen während der Sedimentation in der Zentrifuge ein?
• Was bedeutet der Sedimentationkoeffizient (s)?
• Was ist die Einheit des s-Wertes?
• Was bezeichnet man als Sedimentationsgeschwindigkeits-Lauf?
• Wie wird der Sedimentationkoeffizient mit Hilfe des Sedimentationsgeschwindigkeitlaufs ermittelt?
• Was bezeichnet man als s20w?
• Wie lautet die Svedberg-Gleichung?
• Was bezeichnet man als Sedimentationsgleichgewichtslauf?
• Wie wird die Molmasse mit Hilfe eines Sedimentationsgleichgewichtslaufes ermittelt?

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